使用离心管制备富血小板血浆及血小板浓度检测的方法

2021-03-11 09:21:56

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1、PRP制备

PRP制备全过程严格无菌。10%水合氯醛腹腔注射麻醉(2ml/kg)新西兰大白兔，暴露右侧颈静脉，用预先装有1. 7mlACD-A抗凝剂的20ml注射器，从兔颈静脉抽取17ml血液，轻轻摇匀，从其中取出20ul作全血血小板计数。16m1血液平均注入4只塑料离心管，每管4ml，以4种不同的离心力组合离心:离心方法一:一次离心力200g，二次离心力200g;离心方法二:一次离心力200g，二次离心力1200g;离心方法三:一次离心力1200g，二次离心力200g;离心方法四:一次离心力1200g，二次离心力1200g。一次离心10min后，吸取全部血浆移至另一离心管，平衡后以二次离心力再次离心10min，一次性离心管中液体分为上下两层，上层上清液为乏血小板血浆PPE，下层为血小板浓缩物PO。吸取约3/4上清液弃掉，剩余约0.6ml摇匀，即为PRP.

2、血小板计数

取全血和上述4种离心方法制备的PRP各20ul，加入0. 38ml血小板稀释液中，轻轻摇匀，待红细胞溶解、混悬液变透明后，再轻轻摇动1min，吸取血小板悬液15ul充入血细胞计数室，静置10min后在高倍镜下人工血小板计数。

3、血小板回收率的计算

血小板回收率计算公式:（PRP中血小板总数/全血中血小板总数）x 100%,

4、血浆P选择素浓度检测

分别取四种方法制备的PRP按照ELISA试剂盒说明书进行酶联免疫实验测定血浆中P选择素浓度，并对所得结果用血小板计数进行归一化，计算公式为:归一化后血浆P选择素浓度(单位:ng/个）=血浆P选择素浓度(单位:ng/mD/血小板计数(单位:个/ml）。

离心管.jpg